生姜蛋白酶提取新工艺

关于生姜蛋白酶提取新工艺的研究

食品工业科技

ScienceandTechnologyofFoodIndustry

食品添加剂

生姜蛋白酶提取新工艺

孙国梁,乔园园,刘 涛,王玉林,唐晓珍

(11山东农业大学食品科学与工程学院,山东泰安271018;21黄岛出入境检验检疫局,山东青岛266555;

31山东省科技厅科学器材供应服务站,山东济南250000)

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1,*

摘 要:以生姜为原料,研究了生姜蛋白酶的超滤法提取新工艺。

结果表明:丙酮与浓汁体积比为1B1时,生姜蛋白酶得率和纯度最高,其活力为1713U/mL,比传统工艺高43%。溶解丙酮沉淀所用的缓冲液pH对沉淀中生姜蛋白酶活性的影响不大。

关键词:生姜蛋白酶,提取,酶活力 中图分类号:TS201125 文献标识码:B 文章编号:1002-0306(2007)10-0198-03

+

生姜蛋白酶作为一种肉类嫩化剂,对牛肉、鸡肉[1]

等具有良好的嫩化作用;作为酒类澄清剂,对啤酒、葡萄酒等也具有良好的澄清作用[2]。因此,生姜蛋白酶是有待研究开发的一种重要的植物蛋白酶。对生姜蛋白酶的性质进行研究,对改变我国长期以木瓜、菠萝等少数热带水果作为蛋白酶源的现状具有重要意义。生姜蛋白酶的提取方法很多,但主要是有机溶剂提取法以及盐析沉淀法。这些方法具有提取纯度高的优点,但大都需要首先制备丙酮粉,而丙酮粉的制备操作繁琐,消耗大量丙酮,成本高,效率低。因此,近几年逐步研究了一些新的提取方法,主要有乙醇沉淀法以及超滤法等。超滤法具有操作简单,成本低,效率高,无污染,无有害物质残留等特点,非常适合工业化生产。以前也有超滤法提取生姜蛋白酶的研究,但其是将超滤所得的浓汁直接冷冻干燥作为粗酶粉[3]。本实验在超滤法的基础上研究了生姜蛋白酶提取的新工艺,以超滤后所得的浓汁为酶源,用丙酮沉淀法对其进行部分纯化,所得的生姜蛋白酶既能满足一般工业生产和应用的要求,也能满足一般酶学性质研究的要求。

多功能榨汁机,千岛超滤机,离心机,水浴锅,电子天平,分光光度计。112 测定方法

生姜蛋白酶活力的测定方法,采用Folin-酚[4]

法。生姜蛋白酶活力的定义:在一定温度(40e)下,每分钟分解酪蛋白产生1Lg酪氨酸所需要的酶量为一个酶活力单位。11211 标准曲线的制作 参见参考文献[4]。本实验所得的标准曲线的方程为:y=921224x+212894(n=6,2

R=019963)

y)酪氨酸浓度(Lg/mL);x)吸光度。11212 酶活力测定步骤 蛋白酶液110mL与110mL015%的酪蛋白混合,40e水浴下保温反应10min,加入210mL014mol/L的三氯乙酸终止反应,静置10min后过滤。取110mL滤液与510mL014mol/L碳酸钠溶液和110mLFlion-酚试剂混合,40e下保温发色20min。对照先加入三氯乙酸,后加入生姜蛋白酶液,其他同。然后在680nm处,以对照调消光度0,测样品的吸光度,并按照公式计算酶活力值。

酶活力=A@N@4/10

式中A)根据吸光度,按标准曲线求得酪氨酸的含量(Lg);

N)酶液的最终稀释倍数;4)从4mL取1mL进行比色;10)反应10min。113 生姜蛋白酶的提取方法11311 新方法 生姜y洗净y切碎y榨汁y离心除去淀

粉y抽滤y超滤(常温,工作压力)y取浓汁y加入丙酮y离心y取沉淀y用缓冲液溶解y离心取上清液y粗酶液11312 传统方法 生姜y洗净y切碎y加入丙酮y捣碎y抽滤y丙酮抽滤洗涤三次y干燥y丙酮粉y加入缓冲液y离心y取上清液y加入112倍体积的丙酮y离心y取沉淀y冷冻干燥y粗酶粉

1 材料与方法

111 材料与仪器

生姜 由潍坊神农食品公司提供。

收稿日期:2007-03-30 *通讯联系人

作者简介:孙国梁(1982-),男,在读硕士,研究方向:功能食品的开发。基金项目:山东省自然科学基金项目(Q2004B01)。

114 各因素对提取的影响

11411 加入丙酮量的影响 取浓汁1mL,分别加入不同体积的、在-20e下预冷的丙酮,3000r/min离心10min后取沉淀,晾干后称重,然后用1mL缓冲液溶解,测定其中的酶活力以及蛋白质含量。

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